t4 dna ligase 失活

Dna溶液 10 blunting buffer kod 2 5u μl 滅菌水 total 72 2min x 1 1 8 x 10 μl μl pcr産物 10 a attachment mix 60 10min 9 1 μl taq dna polymeraseと抗kod抗体が含まれます dw 2 ligation buffer pta2 vector 上記反応物 t4 dna ligase 室温 30min 形質転換 3 x 5 1 x 1.
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T4 dna ligaseそのものの酵素反応至適温度は37 c であり反応温度を37 c. Dnaをガラスビーズに吸着させて精製する方法がある連結酵素 ligase および連結酵素用緩衝液 t4 ligase がよく用いられるがここでは緩衝液や酵素を含むライゲーションキットを用いるインキュベーター連結反応 ligation は16 で行う.

T4 dna ligase 失活. T4 dna polymeraseで平滑化させます本酵素は 3 5 exonuclease活性と5 3 polymearse活性を持ち 5 突出末端および3 突出末端のどちらの場合も平滑化できます blunting convenience kit p 131 にはt4 dna polymerase とdntpsを含む最適化された10 blunting buﬀ erが入っ. T4 dna ligase カタログ番号 m0202.